葡萄籽中原花青素的液相色谱质谱分析
杨成对1 宋莉晖1 汪聪慧2
(1 清华大学化学系, 北京 100084; 2 公安部二所)
原花青素是迄今为止所发现的最有效的自由基清除剂之一。葡萄籽中原花青素主要由(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素、(-)-表儿茶素没食子酸酯及其二聚、三聚、四聚……最高平均聚合度达十五聚体组成。各单体之间主要通过4→6或4→8键相连,葡萄籽中的原花青素由于聚合度、单体及连接键的不同,结构非常复杂。因此,原花青素的分析分离及结构表征比较困难。本文采用HPLC-MS/MS分析了葡萄籽粗提物中的低聚原花青素,根据各物质的质谱信息对低聚原花青素的组成作了初步分析。
1 实验部分
1.1 原花青素的提取
葡萄籽用粉碎机粉碎,过≤1mm筛,用石油醚抽提油脂后,晾干,加入乙酸乙酯-水混合液,摇振一定时间,过滤,滤液经减压浓缩后, 置真空干燥箱中干燥,得到低聚原花青素。
1.2 LC-MS/MS分析
仪器:液相色谱-质谱联用仪(LTQ型,Thermo Electron Corporation)。
条件:液相色谱分离柱ZorbaxXDB(5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-水(v/v20:80);流速1mL/min;进样量20μL。质谱扫描方式为负离子扫描,电喷雾电离源。
2 结果与讨论
原花青素是一类结构复杂的物质,其结构通式示于图1。葡萄籽粗提物经色谱柱分离后
图1 原花青素结构通式
其结果示于图2。主要色谱峰对应的质谱结果示于图3。保留时间8.03min和9.58min峰的主要质谱信息为m/z577,为[M-H]-,其相对分子量为578;保留时间12.21min和21.18min峰的主要质谱信息为m/z289、m/z579,应为[M-H]-、[2M-H]-,其相对分子量为290;保留时间13.83min峰的主要质谱信息为m/z729,应为[M-H]-,其相对分子量为730;保留时间15.45min峰的主要质谱信息为m/z865,应为[M-H]-,其相对分子量为866。对照原青花素结构,可以推测提取物的主要组分有6种为原花青素成分,分别为两种单体 (M=290)、两种二聚体(M=578)、一种三聚体(M=866)和一种二聚单酯(M=730)。
图3 提取物的质谱分析结果