中药材中5种拟除虫菊酯农药残留量的测定*
王旗1，杨彬2，刘庆1，李晓婷1
（1． 北京大学公共卫生学院，北京100083；
2．北京大学医药卫生分析中心，北京100083）

摘要： 目的 研究中药材中5种拟除虫菊酯农药残留量的测定方法。方法 用石油醚-丙酮混合溶剂超声提取，固相萃取法净化，用气相色谱-电子捕获检测器（ECD）测定。结果 5种拟除虫菊酯农药在3种代表性中药材的加标回收率为72.5—135.0%，相对标准差为7.55-19.09%; 方法的检测限范围为0.001-0.005μg/g。结论 方法灵敏度高，选择性好，操作较为简便，适用于植物性（根、茎类）药材中5种拟除虫菊酯农药残留量的测定。
关键词：拟除虫菊酯农药；残留量测定；中药材

Determination of 5 pyrethroid pesticide residues in Chinese herbal medicines
Wang Qi *1, Yang Bing2, Liu Qing1, Li Xiaoting1
(1. School of Public Health, Peking University, Beijing 100083,China;
2. Center for Instrumentation Analysis, Peking University, Beijing 100083,China)

Abstract: Objective To develop a method for determining 5 pyrethroid pesticide residues in Chinese herbal medicines. Methods Pyrethroid pesticide residues in samples was extracted by ultrasound with organic Solvent , clean-up by solid-phase extraction to remove the interferences of co-extractives, and then was analyzed by gas chromatograph（GC）equipped with an electron capture detector , qualified by the chromatographic peak’s retention time and quantified by the external standard method. Result The recoveries of 5 pyrethroid pesticide residues were in the range 72.5—135.0% for 3 different Chinese herbal medicine samples, with relative standard deviations from 7.55% to 19.09%. Detection limits were in the range 0.001-0.005μg/g. Conclusion The described procedure is simple. The proposed method is sensitive, reliable and is suitable for determining 5 pyrethroid pesticide residues in Chinese herbal medicines.
Key words: pyrethroid pesticide; residues; Chinese herbal medicines

    拟除虫菊酯农药是一类广谱杀虫剂，属高效低毒农药，作为有机氯农药的替代品广泛应用。中药材在种植和仓储过程中可能使用一些拟除虫菊酯类农药，以防治病虫害，同时带来了中药材的农药残留问题。拟除虫菊酯为神经毒物，近年研究证明其具有拟雌激素活性，是干扰内分泌的农药，应加强对其残留量的检测。目前我国尚未制订中药中拟除虫菊酯农药残留限量的国家标准,国际上（如欧盟）对茶叶等食品中菊酯类农药残留规定了严格的限量，对中药也采用食品标准,不少中药出口时因农药残留超标而遭禁。由于中药材成分复杂，其中一些成分的化学结构、理化性质等跟菊酯类农药相似, 严重干扰菊酯类农药残留量的测定；而菊酯类农药施药量小，仅为有机磷、氨基甲酸酯类农药剂量的10-20%，在中药材中的残留量很低，属痕量范畴；菊酯类农药多存在手性中心和顺反异构体，从而使中药材中菊酯类农药残留量的检测难度增大。
    有关拟除虫菊酯类农药残留量的检测方法研究，主要集中在茶叶、蔬菜等食品中 [1-4,5-7]，中药材中菊酯类农药残留量检测的文献报道较少[8,9],仅测定了几种药材中3种菊酯类农药残留量。本文在前人工作的基础上，针对中药材成分复杂、基质干扰严重的特点，研究、建立了适用于根、茎类中药材中5种菊酯类农药残留量的检测方法，应用本方法测定了20个常用中药材品种不同产地的200多批次样品，结果分离良好，灵敏度能满足常用5种菊酯类农药残留限量检测要求。

1 材料与方法
1.1 仪器与试剂：Agilent 6890N 气相色谱仪带电子捕获（63Ni-ECD）检测器；Alltech固相萃取装置；RE-52A旋转蒸发器；甲氰菊酯（Fenpropathrin）、氯氰菊酯(Cypermethrin)、氰戊菊酯(Fenvalerate)、溴氰菊酯(Deltamethrin)（纯度 >99.0%），购自农业部农药检定所，氯氟氰菊酯（Cyhalothrin）美国Chemservice公司产品；正己烷、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、石油醚（60~90℃）均为色谱纯；无水硫酸钠为分析纯，Florisil（60-100目）填料购自Alltech公司。
1.2 实验方法
1.2.1对照品储备液的制备：精密称取甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯适量，分别置50 mL棕色容量瓶中，用色谱纯正己烷溶解，制成每1 mL 分别含1.0 mg上述菊酯农药的对照品储备溶液。
混合对照品储备液的制备：分别精密吸取甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯标准储备液适量，用色谱纯正己烷稀释，制成每1 mL 含甲氰菊酯20μg、氯氟氰菊酯10μg、氯氰菊酯40μg、氰戊菊酯40μg、溴氰菊酯40μg的混合对照品储备液。
1.2.2 色谱条件： Agilent石英毛细管柱DB-5（ 30m x 0.32mm x 0.25μm）；进样口温度：300 ℃；检测器温度：340 ℃；程序升温：初始温度250 ℃，保持30 分钟，以 10 ℃/min 升至270 ℃保持10分钟。载气：高纯氮（纯度>99.9999%），1mL/min; 分流比1:20，进样量 1.0μL。
1.2.3 供试品溶液的制备：药材样品由中国药品生物制品检定所统一采购并鉴定。
药材样品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉（过60目筛），取适量精密称定（约1~2 g），置100 mL具塞锥形瓶中，加入石油醚（60~90℃）-丙酮（体积比为4：1）混合液30 mL，超声处理10 min，过滤，收集滤液，残渣再加30 mL 石油醚-丙酮混合液，重复上述操作两次后，合并滤液于100 mL 旋转蒸发瓶中，在50℃水浴下，减压浓缩至近干，再用5 mL 正己烷替换并浓缩至近干。残渣用2.5 mL正己烷溶解，转移至固相萃取（SPE）小柱上。SPE小柱（从上至下依次为1.5 g无水硫酸钠、1.5 g Florisil 和1.5 g无水硫酸钠），预先分别用5 mL石油醚-乙酸乙酯（9：1）洗脱液和5 mL正己烷活化，用洗脱液10 mL（分四次）洗脱, 收集全部洗脱液, 转移至25 mL 旋转蒸发瓶中，在50℃水浴下，减压浓缩至近干，再用2.5 mL正己烷替换并浓缩至近干， 精密加入正己烷0.5mL使溶解， 按1.2.2 色谱条件进行测定。定量方法按峰面积外标法计算，其中氯氰菊酯的峰面积以4种异构体的峰面积之和计。

2 结果与讨论
2.1 样品前处理方法的确定
2.1.1 洗脱液的确定：用混合对照品溶液过固相萃取柱，分别用两种洗脱液：石油醚-乙酸乙酯（9:1）和正己烷-丙酮（9:1）洗脱，比较其洗脱效果。结果表明，石油醚-乙酸乙酯（9:1）洗脱的对照品溶液，其色谱峰信号强度高，故确定用石油醚-乙酸乙酯（9:1）作为洗脱液。
2.1.2提取溶剂的选择： 取黄芪、甘草供试品各1g，分别用下列五种溶剂提取：①石油醚，②乙腈，③正己烷，④石油醚-丙酮（4：1），⑤正己烷-丙酮（4：1），然后过固相萃取柱，用石油醚-乙酸乙酯（9:1）洗脱，收集全部淋洗液, 氮气吹干, 定容后测定。结果表明: 石油醚、乙腈提取的供试品溶液杂峰较多，正己烷提取的杂峰次多，石油醚-丙酮和正己烷-丙酮提取的杂峰较少；又比较了后两种溶剂提取的加标回收率，确定用石油醚-丙酮作为提取溶剂。
2.2方法的专属性
选用DB-5毛细管柱，程序升温分析，5种菊酯农药对照品先逐个用保留时间进行定性，结果见表1。图1为农药对照品色谱图，图2，图3分别为样品和样品加标的代表性色谱图。结果表明，5种菊酯农药对照品和样品中各被测成分基本达到基线分离。菊酯类农药存在多种异构体，氯氰菊酯在选定的实验条件下展开成4个连绵峰，峰形复杂，仅以保留时间定性，有可能误判，我们用气相色谱-质谱联用进行了定性确认。5种菊酯农药对照品在30min内分离完全，但中药材化学成分复杂，故又程序升温并保持10min，使其他成分全部流出，同时选用较高的进样口温度和检测器温度，以免分析大量样品时易造成的仪器污染。

图1 菊酯农药对照品色谱图
Fig. 1 Chromatogram of Pyrethroid standards

图2 浙贝母样品色谱图
Fig. 2 Chromatogram of typical sample (Bulbus Fritillariae Thunbergii)

图3 浙贝母样品加标色谱图
Fig. 3 Chromatogram of spiked sample (Bulbus Fritillariae Thunbergii)

2.3 标准曲线的线性关系
精密吸取不同体积的菊酯农药混合对照品储备液，制成每1 ml 含甲氰菊酯0 ~ 1000ng、氯氟氰菊酯0 ~ 1000ng、氯氰菊酯0 ~ 2000ng、氰戊菊酯0 ~ 2000ng、溴氰菊酯0 ~ 2000ng的浓度系列，按选定的色谱条件进样， 5种菊酯农药的线性关系见表2。
结果提示，5种菊酯农药在10-1000 (或20-2000) μg/L之间线性关系良好。

2.4 加标回收率
分别取植物性茎、根类代表性药材（浙贝母、党参、黄芪）供试品（约1 g）精密称定, 加入混合对照品溶液，按上述方法制备供试品溶液，进行测定，计算加标回收率（见表3-表5）。结果显示，5种拟除虫菊酯农药在3种代表性中药材的加标回收率为72.5—135.0%，符合痕量分析的要求。

取供试品（约1 g）精密称定, 加入低浓度混合对照品溶液，按上述方法制备3份供试品溶液，进行测定，计算相对标准差(RSD)，作为精密度，结果见表6，表7。平行样测定的RSD均不超过20%。

2.6 检测限与定量限
检测限按信噪比3：1计算，定量限按信噪比10：1计算。结果参见表8。表中所列限量标准是目前报道的国外茶叶最低限量标准，可见方法检测限能满足中药材中菊酯类农药残留量检测的灵敏度要求。

2.7 方法应用
应用本方法测定了黄芪、浙贝母、党参、甘草、西洋参、人参、白芍、三七、丹参、黄柏等20个品种不同产地的中药材（共200多批次），结果表明，本方法分离度好，选择性强，灵敏度高，操作较为简便、快速，适用于植物性（根、茎类）药材中5种拟除虫菊酯农药残留量的测定。

参考文献：
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